实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。主要包括SYBRGreen I 法和TaqMan探针法两种。前者在PCR反应体系中加入过量SYBRGreen I 荧光染料，染料可特异地掺入DNA双链并发射荧光，而游离的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。后者在 PCR扩增时，利用Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步，以此鉴定扩增模板的起始量。
样品要求
细胞数为106以上；动物组织为50mg以上
提供待检测基因名称、种属、变体等信息，并尽量提供genebank号
提供结果
●实验报告，包括引物序列、试剂名称、仪器型号、操作步骤和标准SCI作图等
●原始实验数据
应用实例- miR-21调控肿瘤
miR-21在多种不同类型的肿瘤细胞中持续上调表达，通过促进细胞侵袭、增殖、迁移能力或抑制细胞凋亡等调控肿瘤的发展，已经证明在小鼠模型中条件性的过表达或敲低miR-21表达均能影响肿瘤的发生和进展。本研究通过噬菌体展示技术筛选出miR- 21的调控多肽，并证实该多肽通过结合 pre-miR-21阻断Dicer的加工，以此降低miR-21的表达，并间接影响miR-21靶基因表达水平，进而影响肿瘤细胞的侵袭和迁移。
图1 利用实时定量PCR技术检测出多肽对MCF-7细胞中miR-21的表达有明显抑制作用
Debojit Bose, et al. Selective inhibition of miR-21 by phage display screened peptide. Nucleic Acids Res, 2015.
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