bet9会员备用登录网址

EN

石蜡包埋切片

产品概述

动物组织石蜡切片技术是做病理相关实验需要掌握的一门基本实验操作技术


工具/原料


药品试剂:石蜡、酒精、二甲苯、多聚甲醛、磷酸盐缓冲液等

仪器:组织脱水机、石蜡包埋机、石蜡切片机、摊片机、恒温箱、染色缸、
防脱载玻片、烧杯、量筒等


方法/步骤


1.取材


确定所取材料的来源及部位,纵切还是横切;
取材要迅速,防止阻止发生进一步变化,材料体积要适宜。


2.固定


(1) 固定液的选择

最常用的固定液为中性4%的PFA。它的优点是对组织的渗透力较强,固定均匀,能够保存脂肪和类脂质。配制简单,为病理活检制片所广泛采用。

                                         配方: PH=7.4 PBS                                100m

                                         多聚甲醛                                         4g


(2) 材料固定后的处理

冲洗或漂洗:组织固定后应充分水洗,除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀,否则会影响以后的染色效果。(材料固定后,若暂时不能进行下一步操作,可于70%的酒精溶液或直接与4%的PFA固定液中,于冰箱中4℃存放。)


3.脱水


目的:水和透明剂不能互溶,只有脱去水分后,才能让透明剂进入。
试剂:梯度酒精溶液
流程:70%---85%---95%--100%--- 100% 每步1h-2h左右。
注意事项:保证脱水梯度和每一步脱水时间,水要完全脱净,但也不能过度
脱水(过久使组织变脆、收缩,这个时间大家可以根据自己的实验来摸索一下,不必完全按照本操作来)。


4.透明

目的:无水酒精不能与石蜡相溶,还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液,替换出组织内的酒精,才能使石蜡渗入组织。(二甲苯是最常用的透明剂,可以很好地与石蜡和无水乙醇互溶)
流程:纯二甲苯0.5-1h---纯二甲苯0.5-1h。


5.浸蜡与包埋


目的:用石蜡取代透明剂,使石蜡浸入组织而起支持作用。
过程:石蜡约在60-62℃电热恒温箱内保持熔化状态,组织在其内浸透达一定时间(一般组织约2-4h)组织内的透明剂二甲苯就可被置换出来,整块组织为石蜡分子浸透和填充。最后用一种特制的包埋模具把组织包埋起来,经凝固后组织被埋藏于石蜡内成为一个组织蜡块,因蜡块保持一定硬度,故可借切片机切成一定厚度的切片。

6.切片


切片的厚度应为3-4μm,对一些组织如淋巴结、鼻咽和扁桃体,切片的厚度应为2-3μm,脂肪等组织要切厚些,为5-6μm。


7.摊片、贴片和烤片


摊片:将组织蜡片轻轻移入室温水或5%-10%的乙醇内展平,应避免组织
皱折,若蜡片有气泡用镊尖把气泡赶走。
贴片:将摊片机中的蜡片贴在防脱载玻片上的过程。注意贴片位置和标记组织信息。
烤片:将贴片后的切片放入60-65℃烤箱中烤片20-30分钟,使蜡片水分蒸发和石蜡熔化,组织切片牢固贴在玻片上,取出后可进行染色。




大于二公司
亚博体彩网-登录页面 亚搏体育平台官方-登录页面 kok游戏平台-欢迎您 https://www.kg49.net/ https://www.bt49.com/ https://kg58.net/ https://kg999.net/ 亚博体彩网-登录页面 亚搏体育平台官方-登录页面 kok游戏平台-欢迎您 https://www.kg49.net/ https://www.bt49.com/ https://kg58.net/ https://kg999.net/